琼脂糖系列的离子交换剂是目前生化专用分离介质中的主流产品。该产品克进行高流速操作，分辨率优良，当工作液的离子强度和PH范围发生变化时，床体积没有明显变化，可适用于工业规模生产，可以在位清洗反复使用。
其中Sepharose为非交联结构，不能进行高压灭菌，仅在2-40℃使用
Sepharose系列型号和性能
名称
分离范围/Da
PH稳定性
粒径/μm
流速/cm/h
耐压/Mpa
备注
sepharose 4B
6 × 104-2 × 107
4 —9
50 —150
7 —13
0.008
琼脂糖含量为4%，未交联
sepharose 6B
1 × 104-4 × 106
4 —9
50 —150
7 —13
0.02
琼脂糖含量为6%，未交联
sepharose CL-4B
6 × 104-2 × 107
3 —13
50 —150
7 —13
0.012
经过一次交联，适合含有有机溶剂的分离和蛋白多糖的分离
sepharose CL-6B
1 × 104-4 × 106
3 —13
50 —150
7 —13
0.02
经过一次交联，适合含有有机溶剂的分离和蛋白多糖的分离
准备凝胶:浸泡于20%乙醇中的琼脂糖凝胶CL,用蒸溜水洗涤至无乙醇味,然后75%的凝胶与25%的缓冲液混合成胶浆脱气.缓冲液不应含有显著增加粘性的物质,装柱后用此缓冲液低速平衡.
装柱
下面描述的装柱过程有两步,除了琼脂糖凝胶2B,第二步应在表一给出的恒压下进行,在胶过滤过程中,随柱床高度增加分解也增加,因此至少60cm的柱高是较小的.
平衡所有材料到层析开始进行.如前准备凝胶并脱气.在柱中预先加入少量缓冲液封柱,然后向柱中连续加入凝胶,加入过程中用玻璃棒导流,以减少气泡的引入,填充凝胶直到胶床达到一个恒定的高度.拧紧柱上的盖井和泵连接起来,在表一的第一步中给出的速率下开始平衡.约平衡3倍柱体积的缓冲液后即可上样.
分离条件:使用0.15或大于0.15离子强度的缓冲液来避免溶液分子和胶离子的不必要反应.
洗脱液和样品的准备:为了避免柱滤膜的堵塞,要对样品进行过滤或离心以除去杂质.
柱平衡:在上样前,用至少两倍柱体积的缓冲液来平衡柱子直至基线稳定.
上样:推荐的上样量是柱床体积的2%-5%.
再生:再生是用2-3倍的缓冲液洗柱,然后用新的缓冲液平衡.如果在再生过程中一些如变性蛋白和脂类的物质没有洗脱下来,进行下一个清洁过程.
清洁:卸柱后用1-2倍的柱体积的0.5MNaoH洗涤一小时,要间歇搅拌(除去沉淀蛋白,非特异性蛋白和脂蛋白),待全部沉淀后到掉上清,然后用大量平衡缓冲液洗涤,直至pH一致,就可以再次装柱使用.
储存:储存装好或未装好的胶在4-8℃下以20%乙醇保存.
