501复合饲料烟酸、叶酸检测液相色谱仪

1简介

501烟酸、叶酸液相色谱仪常用于检测复合预混料中烟酸、叶酸的测定—高效液相色谱法。

本检测方法适用于复合预混料和维生素预混料中烟酸、叶酸的测定。测量范围为每千克样品中含烟酸的量在1000mg以上，含叶酸的量在500mg以上。欢迎前来订购501液相色谱仪。

2引用标准

下列标准中所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

GB/T 6682-1992分析实验室用水规格和试验方法

3方法原理

试样中的烟酸、叶酸用水一甲醇一乙酸混合溶液提取，将滤液注人高效液相色谱反相柱上进行分离，用紫外检测器在28 nm波长处定量测定。

4试剂和材料

除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯.水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T 6 682的规定

4.1甲醇:优级纯。

4.2三乙胺

4.3冰乙酸。

4.4烷磺酸钠(PICB6):c ( CH3( CH2)5S03Na)= 0.005mol/l{或p( CH3( CH2)5SO3Na)

=941mg/l)。

4.5标准溶液配制

4.5.1烟酸标准贮备液:称取经过干燥的烟酸标准纯品25.0mg,置于250ml,棕色容量瓶中，用移动相溶解，稀释至刻度，于冰箱保存，可放置一周。

4.5. 2叶酸标准贮备液:称取经过干燥的叶酸标准纯品25.0mg,置于250ml容量瓶中，用碳酸钠溶液(4.8) 溶解，调至pH7.0定容至刻度，于冰箱保存。

4.5. 3烟酸、叶酸标准工作液准确吸取4.5. 1和4.5.2各10ML，用移动相稀释至50ml或100M L该混合标准溶液置于带盖小瓶贮存，供液相色谱仪分析用，当日使用。

4.6提取液:取500mL去离子水，加10mL冰乙酸(4.3),1.3ml三乙胺(4.2)，用去离子水定容至

1l，此时pH为3.2，过0.45um滤膜，取上述溶液850m L与150m L甲醇(4.1)混合

4.7磷酸缓冲液:称取4.84g的磷酸氢二钾(K2HP04),9.82g磷酸二氢钾(KH2P04),溶于去离子水中，加20ml乙腊，用去离子水定容至1L,混匀用2000氢氧化钾调节pH至6.5

4.8碳酸钠溶液:c(Na2CO3)=0.1mol/L.

5仪器、设备

5.1实验室常用仪器设备

5.2超声波水浴

5.3超纯水装置(Millipore或全磨口玻璃蒸馏器)

5.4离心机:3000r/min

5.5高效液相色谱仪:501高效液相色谱仪、紫外可调波长检验器

6试样制备

选取有代表性的样品至少500g，四分法缩减至100g,磨碎，全部通过0.28m m孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。

7分析步骇

7.1试验溶液的制备

称取试样维生素预混料0.5- 1g或复合预混料1-5g,精确至0.0001g,置于100mL棕色容量

瓶中，加10mL碳酸钠溶液(4.8)，浸湿试样加70mL提取液(4.6)混匀，于超声波水浴上振荡提取15min，用提取液定容至刻度，混合均匀，过滤或离心。再经0.45um过滤膜过滤至带盖小瓶中，调整该试验溶液的浓度≤5ug/mL，供高效液相色谱分析用。

7.2测定

7.2.1色谱条件

7.21.1反相离子对色谱条件

柱长:25cm、内径4.0mm不锈钢柱。

固定相:ODS(C18)粒度5um,

移动相:取500m L去离子水，加10ml冰乙酸,1.3ml三乙胺，一小瓶20ml乙烷磺酸钠(4.4),

用去离子水定容至1L，调节pH为3.2，过0.45um滤膜，取上述溶液850mL与150mL甲醇混合，脱气

流速 :1.0mL/min,

温度 :30℃。

进样量 : 20ul。

检测器 : 紫外检测器，使用波长275nm

7.2.1.2反相色谱

柱长 :25cm，内径4mm，不锈钢柱。

固定相 : LichrospherCH-8/11.,粒度5um

移动相 : 2%乙睛磷酸缓冲液(4.7)

流速 : 1.4mL/min.

温度 :室温。

进样体积 :20uL.

检测器 : 紫外检测器，使用波长280nm.

7.2.2定量测定

按高效液相色谱仅说明书调整仪器操作参数和灵敏度(AUFS)，色谱峰分离度符合要求用两次以上相应标准工作液对系统进行校正。向色谱柱注入相应的烟酸、叶酸标准工作液(4.5.3Vg1)和试验溶液7.1Vi)得到色谱峰面积响应值(Psi,Pi，用外标法定量测定

以上标准GB/T 17813-1999

关键词：高效液相色谱仪，复合饲料烟酸、叶酸，测定www.htcee.com