三、操作步骤
1、分别吸取50 μL检测的标准品或样品与对应的孔中（参照表1），然后吸取50 μL单克隆抗体（溶液1）加入每孔中，轻轻混匀。37oC或室温放置90分钟。注意：必须先加标准品或样品，再加单克隆抗体溶液。
2、洗板
在水池边快速甩出酶标板中的液体。取洗涤液加入板孔中，洗涤液量以加满但不溢出板孔为宜。甩出洗涤液，再加洗涤液，重复上述操作三次，每次操作3分钟。在滤纸上拍干。若有洗板机，可直接在洗板机上操作。
注意：切忌溢出互混！
3、每孔加入100 μL酶标二抗稀释液，37oC或室温放置30分钟。
4、洗板
同2方法，此步骤必须洗涤五次，每次3分钟。
5、加底物溶液3
立即用排枪或吸取此种溶液，分别加于板孔中，每孔100 μL，置37oC或室温显色，经常观察，显色时间不超过30分钟。
6、终止反应
有明显颜色显示后，立即加50 μL 溶液4 1 mol/L H2SO4终止反应。
7、判断结果
肉眼观察（白色背景），阴性对照孔应明显黄色。
测光密度，酶标仪取λ=450 nm。注意：加终止液后，30分钟以内检测。
注意：滴加试剂量要准，且试剂不可从一孔流到另一孔中，每种试剂对应一种枪头，不能混淆。