包埋 (1)先将熔化的石蜡倾入包埋生产模型中,再用加热的弯曲钝头镊子轻轻夹取已经过浸蜡的社团块,使社团块的面或被特别指定处的社团面向下埋入熔蜡中;应将社团块平正地置放于包埋生产模型底面的中央处;包埋于同一蜡块内的多块细小社团应彼此靠近并位于同一最简单的面上;腔壁、皮肤和黏膜社团必须垂直包埋(立埋)。 (2)将与社团块相关的病理号小条置入包埋生产模型内熔蜡的一侧。 (3)待包埋生产模型内的熔蜡表面凝固后,即将生产模型移入冷水中加速凝固。
(4)从包埋生产模型中掏出凝固的包埋蜡块(简称蜡快),用刀片去除社团块周围的过多石蜡(社团块周围保留1~2mm石蜡为宜)。将包埋蜡块修整成为规则的正方形或长方形。 (5)将病理号小条安稳地烙贴在蜡块一侧(编号应清晰可见)。 (6)把修整好的蜡块烙贴在撑持器上,以备切片。 (7)使用包埋机的要领按有关厂商的说明书操作。
显示葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性的铅法:
(Glucosel-phosphate phosphohydrolase)
①酶的定位及其生物学意义:
该酶主要位于内质网,是内质网的标志酶。G-6-Pase参与糖代谢,能水解葡萄糖-6-磷酸而释放出葡萄糖和磷酸。
⑵原理:G-6-Pase将底物(葡萄糖-6-磷酸钾盐)水解产生磷酸离子,后者被孵育液中的硝酸铅所捕获,最终反应物为颗粒状的硫化铅沉淀,其反应式如下:
酶Pb(NO3)2
葡萄糖-6-磷酸钾+H2O葡萄糖+磷酸
⑶结果:酶活性部位呈棕色硫化铅颗粒沉淀。在光镜下G-6-Pase活性颗粒较均匀地分布于胞质中。
透明:因脱水剂不能与包埋介质相溶,因而包埋前应用能与包埋介质相溶的化学试剂将组织中的脱水剂置换出来,该过程即为透明。在这个过程中,组织快中的乙醇被媒介溶剂(即透明剂,如二甲苯)取代,因其折光率接近组织蛋白的折光率,光线可以透过,使组织块呈现不同程度的透明状。
二甲苯为无色透明液体,透明能力强,但易使组织块收缩、变硬变脆,因此组织块在二甲苯中时间不宜过长,以达到组织透明为度(组织块呈现棕黄色或暗黄色透明状即可)。另外,苯、甲苯与二甲苯性质相似,也可作透明剂使用。二者对组织块收缩较少,不易使组织硬化变脆,但透明速度慢,需要60min左右。氯仿的透明能力不如二甲苯,且挥发快,容易吸收水分,多用于大组织块(厚1cm)的透明,透明时间为12-24h。