包埋 (1)先将熔化的石蜡倾入包埋生产模型中,再用加热的弯曲钝头镊子轻轻夹取已经过浸蜡的社团块,使社团块的面或被特别指定处的社团面向下埋入熔蜡中;应将社团块平正地置放于包埋生产模型底面的中央处;包埋于同一蜡块内的多块细小社团应彼此靠近并位于同一最简单的面上;腔壁、皮肤和黏膜社团必须垂直包埋(立埋)。 (2)将与社团块相关的病理号小条置入包埋生产模型内熔蜡的一侧。 (3)待包埋生产模型内的熔蜡表面凝固后,即将生产模型移入冷水中加速凝固。
(4)从包埋生产模型中掏出凝固的包埋蜡块(简称蜡快),用刀片去除社团块周围的过多石蜡(社团块周围保留1~2mm石蜡为宜)。将包埋蜡块修整成为规则的正方形或长方形。 (5)将病理号小条安稳地烙贴在蜡块一侧(编号应清晰可见)。 (6)把修整好的蜡块烙贴在撑持器上,以备切片。 (7)使用包埋机的要领按有关厂商的说明书操作。
常规切片制备的操作流程及要求
㈠社团块依序进行:①水洗,②脱水,③透明,④浸蜡,⑤包埋和⑥切片。 ㈡社团切片制备及其HE染色过程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡等为易燃、有毒物,必须专人管理,2m以内不患上有有焰的火,局部环境应有良好的透风和救火设施。 ㈢常规切片的手工操作(步骤次序和各步骤的持续时间) 1.水洗:用水流冲洗已经固定的社团块30min。 2.脱水(常温下) (1)乙醇-甲醛(AF)液固定 60~120min (2)80%乙醇 60~120min (3)95%乙醇Ⅰ 60~120min (4)95%乙醇Ⅱ 60~120min (5)无水乙醇Ⅰ 60~120min (6)无水乙醇Ⅱ 60~120min (7)无水乙醇Ⅲ 60min [注意事项]①未经充分固定的社团不患上进入脱水程序。②用于脱水的试剂容积应为社团块总体积的5~10倍以上。③自低浓度乙醇向高浓度乙醇逐级移进脱水。④脱水试剂应及时过滤、更换(500ml乙醇可用于500个社团块脱水;加入硫酸铜的无水乙醇变蓝时,提示需要更换)。⑤较大社团块的脱水时间长于较小者,应将两者分隔进行脱水。⑥社团置于无水乙醇内的时间不宜过长(以免硬化)。⑦丙酮脱水性能强,会使社团块过缩、硬脆,不宜用以替换无水乙醇。
包埋
①包埋一般用硬蜡,即熔点为60-62℃的石蜡。包埋用的石蜡熔点要和浸蜡用的石蜡熔点相一致。
②包埋用的石蜡温度药稍高于浸蜡的温度,维持在65-68℃,但是不可过高,否则易造成组织的烫伤,而实验结果。
③包埋过程操作要迅速,以免在组织块尚未埋妥前熔蜡凝固。
④黏膜、囊壁、皮肤组织必须垂直于包埋盒的地面包埋,习惯称为立埋或立包。血管壁也应立埋。
切片
①切片刀要锋利,刀口无缺损,才能切出完整的薄片。目前多用一次性刀片切片,切片质量良好。若用重型全钢刀,则要经常研磨,以保持其锋利、无缺损。
②骨与其它钙化组织必须先脱去钙盐,再经述各步骤处理后,才能切片。