包埋 (1)先将熔化的石蜡倾入包埋生产模型中,再用加热的弯曲钝头镊子轻轻夹取已经过浸蜡的社团块,使社团块的面或被特别指定处的社团面向下埋入熔蜡中;应将社团块平正地置放于包埋生产模型底面的中央处;包埋于同一蜡块内的多块细小社团应彼此靠近并位于同一最简单的面上;腔壁、皮肤和黏膜社团必须垂直包埋(立埋)。 (2)将与社团块相关的病理号小条置入包埋生产模型内熔蜡的一侧。 (3)待包埋生产模型内的熔蜡表面凝固后,即将生产模型移入冷水中加速凝固。
(4)从包埋生产模型中掏出凝固的包埋蜡块(简称蜡快),用刀片去除社团块周围的过多石蜡(社团块周围保留1~2mm石蜡为宜)。将包埋蜡块修整成为规则的正方形或长方形。 (5)将病理号小条安稳地烙贴在蜡块一侧(编号应清晰可见)。 (6)把修整好的蜡块烙贴在撑持器上,以备切片。 (7)使用包埋机的要领按有关厂商的说明书操作。
脱水
①以上各级乙醇脱水时间可根据组织块的大小适当调整。对于小的组织块(如胃黏膜、支气管粘膜等)可适当减少脱水时间,对于较大的组织块可适当增加脱水时间,但各级乙醇最长不要超过12h,无水乙醇不要超过4h。如中途因故不能继续进行下去,则可将标本退回至80%乙醇中保存。另外,脂肪组织和疏松结缔组织一般应延长脱水时间,在95%乙醇中水分必须脱净,脂肪必须溶解掉(50%以上浓度的乙醇可溶解脂肪和类脂质)。否则,石蜡不能渗入脂肪细胞和纤维组织,无法切出好的切片,而且染色时也易脱片。
②若组织含水分过多(如胚胎组织),则脱水剂浓度应由更低级乙醇(如30-40%乙醇)开始,这对保证制片质量十分重要。
③若脱水不尽,切片后蜡块切面组织常出现凹陷(因蜡块中包埋的组织与空气接触后即干燥收缩)。这样的蜡块,虽能勉强切出切片,但染色效果极差,染色时组织也容易脱落。因此,脱水必须彻底,脱水彻底与否是制片质量好坏的一个重要环节。
④脱水剂的容积应为组织块总体积的5-10倍,脱水剂应及时过滤,更换。
石蜡包埋切片制作法
这是最常用的切片法。以石蜡作为组织的填充支持介质,将整块组织加以包埋,最后凝固成均匀一致的固态结构。用切片机制取极薄的切片。为了让石蜡能浸入组织内部,需将组织经过脱水等处理。过程大致如下:
⑴固定:生物标本脱离机体或培养环境,细胞会发生自溶,腐败分解。因此,需用固定剂处理,使蛋白质凝固停止濒死或死后变化。凡供永久保存的标本都需经固定处理。
常用的固定剂是甲醛、乙醇等,能使蛋白质凝固。还有由几种试剂配成的固定液,例如Carnoy固定液,由无水酒精、氯仿、冰醋酸配成,固定力更快更强,不含水分,可避免水溶性物质如糖原等在固定过程中损失。