TOYOPEARLHIC疏水作用层析介质
疏水作用层析HIC 疏水作用层析是生物分子纯化的重要手段，是体积排阻和离子交换层析的重要补充。疏水作用层析利用蛋白质表面的疏水区域进行分离，用它来分离等电点和分子量接近的成分尤为有效。HIC也可以用在亲和层析之后，因为亲和层析无法分离有相似识别结构的蛋白。
HIC原理
高盐浓度下，蛋白质的疏水表面结合到HIC树脂表面温和的疏水区域，（不同于反相介质强得多的疏水表面），如果降低盐浓度，结合物与树脂相脱落。当盐浓度为0时，绝大多数物质会解吸附。选择合适疏水性的树脂与样品相匹配很重要
日本Tosoh公司提供了五种疏水作用介质，它们有不同的化学表面和不同的疏水性。TOYOPEARL 疏水作用介质的疏水性按如下顺序依次升高：Ether(醚基型)、PPG(聚丙二醇基)、 Phenyl (苯基)、Butyl(丁基)、 Hexyl(己基)。 分辨率和选择性蛋白质在高盐浓度时吸附在树脂上的吸附强度与树脂疏水性和盐浓度直接相关.选择合适的疏水作用介质,无机盐的用量可以降低到最低, 活性收率最高. 高疏水性的TOYOPEARL Hexyl 和TOYOPEARL Butyl常用来分离低疏水性的蛋白. TOYOPEARL Ether常用来纯化疏水性很强的蛋白质,如单克隆抗体和膜蛋白.这两种蛋白会和其它疏水介质结合的非常牢固而导致低的回收率.
性 能 | 特 点 |
| 亲水的聚合物基材 | 优秀的化学稳定性, pH1~13, 可使用酸碱调整 操作温度4~60℃, 可121℃高温消毒 耐受常用的有机溶剂 在宽的盐浓度下保持稳定的柱床体积 低的非特异性蛋白吸附 高的蛋白活性收率 |
| 良好的机械稳定性 | 既便在工业规模层析柱内也保持优秀的流动特性 可以从TSK-GEL HIC HPLC色谱柱直接放大 |
五种TOYOPEARL HIC树脂的技术参数
| Ether-650 | PPG-600M | Phenyl-650 | Butyl-650 | Hexyl-650 | ||
介质类型 | 疏水作用较弱 | 疏水作用稍强 | 疏水作用较强 | 疏水作用更强 | 疏水作用最强 | |
| 功能基团 | - (O-CH2-CH2)n-OH | -(O-C3H6)n-OH | -O-phenyl | -O-(CH2)3-CH3 | -O-(CH2)5-CH3 | |
(mg Lysozyme/ml树脂) | 10 - 30 | 30-50 | 30-50 | 30-50 | 30-50 | |
| pH长期稳定性 | 0-14 | 0-14 | 0-14 | 0-14 | 0-14 | |
| pH短期稳定性 | 1-13 | 1-13 | 1-13 | 1-13 | 1-13 | |
| 解析条件 | 低盐浓度 | 低盐浓度 | 低盐浓度 | 低盐浓度 | 低盐浓度 | |
| 可使用的线流速 | 600 cm/h | 600 cm/h | 600 cm/h | 600 cm/h | 600 cm/h | |
| 使用温度 | 4 - 60℃ | 4 - 60℃ | 4 - 60℃ | 4 - 60℃ | 4 - 60℃ | |
| 最大承压 | 0.5 MPa | 0.5 MPa | 0.5 MPa | 0.5 MPa | 0.5 MPa |
层析柱 | 7.4mm×7.5cm |
样 品 | 1. myoglobin 球蛋白 2. ribonuclease A 核糖核酸酶A 3. lysozyme溶菌酶 4.α-chycotrypsinogen α-糜蛋白酶原 |
流动相 | 1.8M(NH4)2SO4的0.1M磷酸盐缓冲液(pH7.0) 60min线性洗脱 |
流 速 | 136cm/h |
检 测 | UV 280nm |
不同粒径的TOYOPEARL HIC树脂所得的柱效 TOYOPEARL HIC疏水作用层析介质
疏水作用层析HIC
疏水作用层析是生物分子纯化的重要手段，是体积排阻和离子交换层析的重要补充。疏水作用层析利用蛋白质表面的疏水区域进行分离，用它来分离等电点和分子量接近的成分尤为有效。HIC也可以用在亲和层析之后，因为亲和层析无法分离有相似识别结构的蛋白。
HIC原理
高盐浓度下，蛋白质的疏水表面结合到HIC树脂表面温和的疏水区域，（不同于反相介质强得多的疏水表面），如果降低盐浓度，结合物与树脂相脱落。当盐浓度为0时，绝大多数物质会解吸附。选择合适疏水性的树脂与样品相匹配很重要
日本Tosoh公司提供了五种疏水作用介质，它们有不同的化学表面和不同的疏水性。TOYOPEARL 疏水作用介质的疏水性按如下顺序依次升高：Ether(醚基型)、PPG(聚丙二醇基)、 Phenyl (苯基)、Butyl(丁基)、 Hexyl(己基)。
分辨率和选择性
蛋白质在高盐浓度时吸附在树脂上的吸附强度与树脂疏水性和盐浓度直接相关.选择合适的疏水作用介质,无机盐的用量可以降低到最低, 活性收率最高. 高疏水性的TOYOPEARL Hexyl 和TOYOPEARL Butyl常用来分离低疏水性的蛋白. TOYOPEARL Ether常用来纯化疏水性很强的蛋白质,如单克隆抗体和膜蛋白.这两种蛋白会和其它疏水介质结合的非常牢固而导致低的回收率.
性 能 | 特 点 |
| 亲水的聚合物基材 | 优秀的化学稳定性, pH1~13, 可使用酸碱调整 操作温度4~60℃, 可121℃高温消毒 耐受常用的有机溶剂 在宽的盐浓度下保持稳定的柱床体积 低的非特异性蛋白吸附 高的蛋白活性收率 |
| 良好的机械稳定性 | 既便在工业规模层析柱内也保持优秀的流动特性 可以从TSK-GEL HIC HPLC色谱柱直接放大 |
五种TOYOPEARL HIC树脂的技术参数
| Ether-650 | PPG-600M | Phenyl-650 | Butyl-650 | Hexyl-650 | ||
介质类型 | 疏水作用较弱 | 疏水作用稍强 | 疏水作用较强 | 疏水作用更强 | 疏水作用最强 | |
| 功能基团 | - (O-CH2-CH2)n-OH | -(O-C3H6)n-OH | -O-phenyl | -O-(CH2)3-CH3 | -O-(CH2)5-CH3 | |
(mg Lysozyme/ml树脂)
| 10 - 30 | 30-50 | 30-50 | 30-50 | 30-50 | |
| pH长期稳定性 | 0-14 | 0-14 | 0-14 | 0-14 | 0-14 | |
| pH短期稳定性 | 1-13 | 1-13 | 1-13 | 1-13 | 1-13 | |
| 解析条件 | 低盐浓度 | 低盐浓度 | 低盐浓度 | 低盐浓度 | 低盐浓度 | |
| 可使用的线流速 | 600 cm/h | 600 cm/h | 600 cm/h | 600 cm/h | 600 cm/h | |
| 使用温度 | 4 - 60℃ | 4 - 60℃ | 4 - 60℃ | 4 - 60℃ | 4 - 60℃ | |
| 最大承压 | 0.5 MPa | 0.5 MPa | 0.5 MPa | 0.5 MPa | 0.5 MPa |
层析柱 | 7.4mm×7.5cm |
样品 | 1. myoglobin 球蛋白2. ribonuclease A核糖核酸酶A3. lysozyme溶菌酶4.α-chycotrypsinogen α-糜蛋白酶原 |
流动相 | 1.8M(NH4)2SO4的0.1M磷酸盐缓冲液(pH7.0) 60min线性洗脱 |
流速 | 136cm/h |
检测 | UV 280nm |
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