选择合适的培养基
选择合适的培养基是植物组织培养成功的基础。选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑:一是基本培养基;二是各种ji素的浓度及相对比例。MS培养基适合于大多数双子叶植物,B5和N6培养基适合与许多单子叶植物,特别是N6培养基对禾本科植物小麦、水稻等很有效,White培养基适合于根的培养。首先试用这些培养基进行初步实验,可以少走弯路,大大;减少时间、人力和物力的消耗。当通过一系列初试之后,可再根据实际情况对其中的某些成分做小范围调整。在进行调整时,以下情况可供参考。一是当用一种化合物作为氮源时,xiao酸盐的作用比铵盐好,但单独使用xiao酸盐会使培养基的PH向碱性方向漂移,若同时加入xiao酸盐和少量铵盐,会使这种漂移得到克服。二是当某些元素供应不足时,培养的植物会表现出一些症状,可根据症状加以调整,如氮不足时,培养的组织常表现出花色苷的颜色(红、紫红色),愈伤组织内部很难看到导管分子的分化;当氮、钾或磷不足时,细胞会明显过度生长,形成一些十分蓬松,甚至呈透明状的愈伤组织;铁、硫缺少时组织会失绿,细胞分裂停滞,愈伤组织出现褐色衰老症状;缺硼时细胞分裂趋势缓慢,过度伸长;缺少锰或钼时细胞生长受到影响。培养基外源ji素的作用也会使培养物出现上述一些类似的情况,所以应仔细分析,不可轻易下结论。
组培设备制造商培养基的配制
配制培养基有两种方法可以选择,一是购买培养基中所有化学药品,按照需要自己配制;二是购买商品的混合好的培养基基本成分粉剂,如 MS、B5等。
自己配制可以节约费用,但浪费时间、人力、且有时由于药品的质量问题,给实验带来麻烦。就目前国内的情况看,大部分还是自己配制。为了方便起见,现以MS培养基为例介绍配置培养基的主要过程。
组培设备与条件
开展植物组织培养工作需要一个比较合理实用的场所,一套适宜的设备和提供必要的实验环境条件,这是首先要考虑到的。根据科学、合理的原则,一个较为理想的配置应该包括:
1、化学药品室
2、配培养基室
3、灭菌室
4、接种室
5、无菌培养室
基本仪器设备与用品
1、仪器设备
超净工作台、高压灭菌锅(手提式、立式或卧式)、小推车(可选)、精密电子天平(至少千分之一)、电子天平或托盘天平、酸度计、普通冰箱、烘箱、解剖镜、光照培养箱(选购)、电炉、微量可调移液器及配套吸嘴、移液管架、磁力搅拌器(可选)、不锈钢托盘、灌装机(可选)、培养架、定时器(控制光照时间)、紫外线杀菌灯、照度计(可选)、温湿度计(可选)蒸馏水器、摇床(可选)、针头滤器及配套滤膜
2、小型用品
枪镊,弯剪、解剖刀、接种盘
3、玻璃器皿
组培瓶(玻璃或塑料)、烧杯、量筒、移液管、试剂瓶、移液管架、容量瓶、试管、酒精、玻璃棒、滴瓶
4、组培药品 (详细药品请见常用配方)
5、其他
吸耳球、刷子、记号笔、定时钟、手套、封口膜、卫生药棉、拖鞋、口罩、白大褂、滤纸、洗瓶
培养条件
在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件,培养基组成、 PH值、渗透压等各种化学环境条件都回影响组织培养育苗的生长和发育。