GST融合蛋白纯化试剂盒

GST MiniSpin Purification kit

【试剂盒原理】

      将目标蛋白与GST融合表达，然后利用固定化的谷guang甘tai进行纯化，是比较经典的纯化路线。简单，快捷，纯度高。本试剂盒将亲合层析技术与离心柱技术相结合，提供了一种快速简便的融合蛋白纯化途径。

【技术指标】

GSH Sepharose 4B（ameshame pharmacia）  

结合载量：10mg/ml。本试剂盒的填料是独立包装的50%悬液。可根据需要调节用量.一般每次标准操作使用100ul，结合载量500ug。

样品处理量：用小离心柱纯化，每个样品纯化蛋白500 µg；也可以根据样品量自由调节。

操作时间：小量纯化小于30分钟。

我们的优势：

◆ 填料为GE原装，质量稳定。
◆ 售后技术有保障。
◆ 价格低廉，进口的质量。
◆ 交货便捷，充足的备货，快速发货。

GST融合蛋白小量纯化试剂盒组成

蛋白表达中菌体裂解及相关处理

一、一般裂解方法

1. 溶菌酶（10mg/ml），加2ul/100ul细胞悬液，室温10分钟。可选：加入DNase l 终浓度10ug/ml。

2. 在液氮或干冰中冻5分钟然后取出放入热水中，重复此操作10次。

   如果菌体量大于10ml时，应该使用超声裂解。

3. 高速离心沉淀。如果是分泌表达和可溶性表达，则产物在上清；如果是包涵体则在沉淀中。

二、关于包涵体处理

包涵体比较麻烦。使用变性剂溶解包涵体，但是GST融合蛋白在变性条件下不能被GST填料结合。这点不如6×His融合蛋白方便。但是这一点，既有弊也有利。因为只要能纯化的，基本就是有活性的。解决GST融合蛋白包涵体的问题没有统一的固定方法，可以参考的方法很多。

（一）、防止形成包涵体

     1、降低表达量，使用较少的诱导剂，如0.1mM的lPTG；

     2、开始诱导时间晚些，获得更高浓度细胞；

     3、诱导时间短些；

     4、把培养温度保持在20～30摄氏度而不用37度；

     5、增加通气量。

（二）、包涵体的溶解

 1、4-8M盐酸胍；

 2、4-8M尿素；

 3、有机试剂（Schein, Bio/Technology 8,308,1990 ; Marsten,Biochem J.240,1,1986）

 4、加Sarkosy1 （Gentry，Prot，Express. Purificat. 1 81，1990； Frangioni，Anal.Biochem.210，179，1993） 溶解后，还要渐渐去除变性剂促使正确折叠。上面文献中有介绍。一般是稀释，凝胶过滤（分子筛，如sephadex）

（三）、轻微变性条件下纯化（有些成功，但不一定适合所有情况，与蛋白的性质有关）

     1、2-3M盐酸胍 或尿素；

     2、2%Tween 20；

     3、1%CTAB，10mM DTT或0.03%SDS

三、关于洗脱

可以稍微加大洗脱体积，在4度过夜，使用更高浓度的GSH（10-15mM），也可以在洗脱液中加入

0.1%Triton X-100，可以提高洗脱效率。

分子克隆第三版中也介绍了很好的方法。