人白介素6试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗人IL-6单克隆抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体,经过孵育,样本中存在的IL-6与固相抗体和检测抗体结合。洗涤去除未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。洗涤后,加入显色底物TMB,避光显色。颜色反应的深浅与样本中IL-6的浓度成正比。加入终止液终止反应,在450 nm波长测定吸光度值。
人白介素6试剂盒的实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素6(IL-6)水平。用纯化的人白介素6(IL-6)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白介素6(IL-6),再与HRP标记的白介素6(IL-6)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成蕞终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人白介素6(IL-6)浓度。
人白介素6试剂盒组成及试剂配制:
1.酶联板(Assayplate):一块(96孔)。
2.标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(SampleDiluent):1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibodyDiluent):1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidinDiluent):1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7.辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8.底物溶液(TMBSubstrate):1×10ml/瓶。
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