培养条件培养前，应对模拟灌装产品进行颠倒、轻摇以使培养基接触所有内表面。培养时间至少 14 天，也可采用其它方法，但必须进行验证证明其有效性。培养温度应有利于在环境或产品中发现的微生物的生长，一般采用先在 20-25℃最少培养 7 天，然后在30-35℃的范围继续培养 7 天。 也可采用单一的 20-35℃的培养条件，但应有相关的数据证明培养条件有利于微生物的生长。在整个培养期间应连续监控培养温度。

无菌生产工艺的设计基于对产品特性、工艺技术和无菌保证措施的认知和经验的累积。设计模拟试验方案前应对无菌生产过程开展系统性风险评估，以充分识别无菌生产过程中潜在风险点。模拟试验方案设计时，应重点考察和评估高风险的无菌操作过程。无菌生产工艺的暴露操作是影响最终产品无菌特性的重要环节，如设备（或管道）的无菌连接、无菌容器的转运和更换、灌装等关键操作。模拟试验方案设计应考察以上过程无菌保证措施的有效性。

在使用模拟介质前应对其适用性进行确认，包括无菌试验、抑菌试验、溶解度试验等。抑菌试验通常使用枯草芽孢杆菌（CMCC63501）和白色念珠菌（CMCC98001）。除此之外，还应考虑加入环境和无菌检查中发现的典型微生物。无菌模拟介质由无菌注射用水分散，然后加入到无菌培养基中，达到模拟工艺选用的浓度范围。然后在每份培养基中接种10-100CFU。阳性对照接种到不含无菌模拟介质的试管中，在20-25℃培养7天所有试管应明显浑浊。