ColProof®细胞和组织RNA快速提取试剂盒
Col-R0101
试剂盒应用
本试剂盒采用专利***配方在 10 分钟内完成细胞和组织样本的***、提取和纯化。无需使用蛋白酶 K、无需低温离心。该配方中含有 RNA 保护剂，能够抑制 RNA 降解、保护 RNA 完整，从而提高 RNA 产量。提取 RNA 可用于 RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文库构建等。
本试剂盒仅供研究使用，不可用于临床、食品、化妆品等领域。
使用方法
1. 样本处理
1.1 从动物组织中提取 RNA
1.1.1 取 20-100mg 样本放入液氮中充分研磨后，加入 700μL ***，颠倒混匀。
或者取 20-100mg 样本加入 700μL *** C，加入 1 颗钢珠，放入组织研磨器中，研磨 1-2 分钟。
备注：不同样本中 RNA 含量差异很大，过多使用样本容易导致堵塞，*终导致 RNA 提取量下降。
1.1.2 55℃孵育 1 分钟。
1.1.3 12,000rpm 离心 1 分钟，取 500μL 上清。
1.1.4 加入 250μL ****，充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。
1.2 从悬浮细胞中提取 RNA
1.2.1 细胞 1,000rpm 离心 5 分钟，收集细胞沉淀。
1.2.2 细胞数量<5×10 6个时，加入 500μL*** C。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时，加入 700μL *** C。轻轻吹打混匀。55℃孵育 1 分钟。
1.2.3 12,000rpm 离心 1 分钟。
1.2.4 细胞数量<5×10 6个时，取 450μL 上清。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时，取 650μL 上清。
1.2.5 加入 0.5 倍体积****，充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。
1.3 从贴壁细胞中提取 RNA
1.3.1 **消化细胞后 1,000rpm 离心 5 分钟，收集细胞沉淀。
1.3.2 细胞数量<5×10 6个时，加入 500μL ***C。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时，加入 700μL *** C。轻轻吹打混匀。55℃孵育 1 分钟。
1.3.3 12,000rpm 离心 1 分钟。
1.2.4 细胞数量<5×10 6个时，取 450μL 上清。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时，取 650μL 上清。
1.2.5 加入 0.5 倍体积****，充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。
2. RNA 纯化
2.1 全部加入 RNA 吸附柱中，12,000rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中废液。
2.2 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗涤液 CW1，12,000rpm 离心 30 秒，倒掉收集管中废液。
2.3 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗涤液 CW2，12,000rpm 离心 30 秒，倒掉收集管中废液。
2.4 重复步骤 2.3 一次。
2.5 12,000rpm 离心 2 分钟，倒掉收集管中废液。
2.6 将 RNA 吸附柱放入新 1.5mL 无 DNase 无 RNase 离心管中，加入 30-50μL 洗脱液 C，室温放置 1分钟。
2.7 12,000rpm 离心 2 分钟，得到 RNA 溶液，-80℃保存。
注意事项
1. 务必在超净台中进行操作，常换手套，防止 RNA 降解。
2. 尽可能使用新鲜样本进行 RNA 提取。
3. 使用无 DNase 无 RNase 的吸头和离心管，防止 RNA 降解，常更换吸头，防止交叉污染。
4. 为了提高洗脱效率，可提前将洗脱液 C 置于 65℃水浴后再使用。
5. 根据后续试验需求，请使用 DNase I（货号 QR0102）进行基因组清除。
10分钟内从培养细胞（悬浮细胞和贴壁细胞）和动物组织（例如心、肝、脾等）中提取总RNA
