ColProof®细胞和组织DNA快速提取试剂盒
Col-D0101
试剂盒应用
本试剂盒针对哺乳动物细胞、组织开发的裂解液 DC，在 10 分钟内完成细胞和组织的裂解、提取和
纯化。使用高效硅基 DNA 纯化柱，高效结合基因组 DNA，从而获得纯度高，产量高的基因组 DNA。
提取的基因组 DNA 完整性高，适合 PCR、qPCR、酶切、克隆、Southern 杂交、文库构建等。
本试剂盒仅供研究使用，不可用于临床、食品、化妆品等领域。
使用方法
1. 样本处理
1.1 从动物组织中提取 DNA
1.1.1 取 20-100mg 样本放入液氮中充分研磨，加入 700μL 裂解液 DC，充分混匀，室温作用 1 分钟。
或取 20-100mg 样本加入 700μL 裂解液 DC，加入 1 颗**，放入组织研磨器中，研磨 1-2 分钟
备注：不同样本中 DNA 含量差异很大，过多使用样本容易导致堵塞，*终导致 DNA 提取量下降。1.1.2 55℃孵育 1 分钟。
1.1.3 1****rpm离心 1 分钟。取 500μL 上清。
1.1.4 （选做）加入 5μL RNase A（10mg/mL），室温静置 5-10 分钟。
1.1.5 加入 250μL 无水乙*，充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。
1.2 从细胞中提取 DNA
1.2.1 悬浮细胞1,000rpm离心 5 分钟，收集细胞沉淀。
或者贴壁细胞经过胰酶消化后 1,000rpm 离心 5 分钟，收集细胞沉淀。
1.2.2 细胞数量<5×10
6个时，加入 500μL 裂解液 DC。细胞数量为 5×10
6~1×10
7个时，加入 700μL 裂解液 DC。轻轻吹打混匀，55℃孵育 1 分钟。
1.2.3 1****rpm 离心 1 分钟。
1.2.4 细胞数量<5×10
6个时，取 450μL 上清。细胞数量为 5×10
6~1×10
7个时，取 650μL 上清。
1.2.5（选做）加入 5μL RNase A（10mg/mL），室温静置 5-10 分钟。
1.2.6 加入 0.5 倍体积无水乙*，充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。
2. DNA 纯化
2.1 全部转移到 DNA 吸附柱中，12,000rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中废液。
2.2 向 DNA 吸附柱中加入 500μL 洗涤液 DCW1，12,000rpm 离心 30 秒，倒掉收集管中废液。
2.3 向 DNA 吸附柱中加入 500μL 洗涤液 DCW2，12,000rpm 离心 30 秒，倒掉收集管中废液。
2.4 重复步骤 2.3 一次。
2.5 12,000rpm 离心 2 分钟，倒掉收集管中废液。
2.6 将 DNA 吸附柱放入新无 DNase 和无 RNase 离心管，加入 30-50μL 洗脱液 C，室温放置 1 分钟。
2.7 12,000rpm 离心 2 分钟，得到 DNA 溶液，-80℃保存。
注意事项
1. 经常更换手套，防止 DNA 污染。
2. 使用无 DNase 无 RNase 的吸头和离心管，防止 DNA 降解。
3. 常更换吸头，防止交叉污染。
4. 动作轻柔，防止基因组 DNA 断裂。
5. 为了提高洗脱效率，可提前将洗脱液 C 置于 65℃水浴后再使用。
10分钟内从培养细胞和动物组织（例如心、肝等）中提取基因组DNA
