ColProof®RNA病毒快速提取试剂盒
Col-R0502
试剂盒应用
本试剂盒采用**裂解液配方，有针对性的从组织、培养细胞、拭子、血液、尿液、唾液、环境样本中获得病毒 RNA。裂解、提取和纯化只需 10 分钟。该配方中添加 RNA 保护剂，能够抑制 RNA降解、保护 RNA 完整，从而提高 RNA 产量。提取后的 RNA 可直接用于 RT-PCR、RT-qPCR、分子克隆、文库构建等实验。
本试剂盒仅供研究使用，不可用于临床、食品、化妆品等领域。
使用方法
1. 样本处理方法
1.1 从动物组织中提取
1.1.1 取 20-100mg 组织样本放入液氮中充分研磨，加入 700μL 裂解液 VR，颠倒混匀。
或者取 20-100mg 组织样本加入 700μL 裂解液 VR，加入 1 颗**，放入组织研磨器中，研磨 1-2 分钟。
1.1.2 55℃孵育 1 分钟。12,000rpm 离心 1 分钟。
1.1.3 取 500μL 上清加入 250μL 无水乙*，充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 进行操作。
1.2 从细胞中提取
1.2.1 悬浮细胞 1,000rpm 离心 5 分钟，收集细胞沉淀。
或者贴壁细胞用胰酶消化后 1,000rpm 离心 5 分钟，收集细胞沉淀。
1.2.2 细胞数量<5×10
6个时，加入 500μL 裂解液 VR。细胞数量为 5×10
6~1×10
7个时，加入 700μL 裂
解液 VR。轻轻吹打混匀，55℃孵育 1 分钟。
1.2.3 12,000rpm 离心 1 分钟。
1.2.4 细胞数量<5×10
6个时，取 450μL 上清。细胞数量为 5×10
6~1×10
7个时，取 650μL 上清。
1.2.5 加入 0.5 倍体积无水乙醇，充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。
1.3 从血液、尿液、唾液、细胞上清液中提取
1.3.1 300μL 样本中加入 500μL 裂解液 VR。颠倒混匀，55℃孵育 1 分钟。
1.3.2 加入 400μL 无水乙醇，上下颠倒混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。
1.4 从拭子中提取
1.4.1 拭子置于 700μL 裂解液 VR 中，颠倒混匀，55℃孵育 1 分钟。
1.4.2 加入 350μL 无水乙醇，上下颠倒混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。
2. RNA 提取
2.1 全部加入 RNA 吸附柱中（如有需要可离心两次），12,000rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中废液。
2.2 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗涤液 VRI，12,000rpm 离心 30 秒，倒掉收集管中废液。
2.3 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗涤液 VRII，12,000rpm 离心 30 秒，倒掉收集管中废液。
2.4 重复步骤 2.3 一次。
2.5 12,000rpm 离心 2 分钟，倒掉收集管中废液。
2.6 将 RNA 吸附柱放入新 1.5mL 无 DNase 无 RNase 离心管中，加入 30-50μL 洗脱液 V，室温放置 1分钟。
2.7 12,000rpm 离心 2 分钟，得到 RNA 溶液，-80℃保存。
注意事项
1、务必在超净台中进行操作，常换手套，防止 RNA 降解。
2、尽可能使用新鲜样本进行 RNA 提取。
3、使用无 DNase 无 RNase 的吸头和离心管，防止 RNA 降解，常更换吸头，防止交叉污染。
4、为了提高洗脱效率，可提前将洗脱液 V 置于 65℃水浴后再使用。
10分钟内从各类样本（例如组织、培养细胞、拭子、血液、尿液、唾液等）中提取病毒RNA
