本试剂盒针对细菌特征开发的裂解液 BA 能够在 10 分钟内将细菌裂解,10 分钟完成细菌的提取和纯化。该配方中含有 RNA 保护剂,能够抑制 RNA 降解、保护 RNA 完整,从而提高 RNA 产量。提取RNA 可用于 RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文库构建等。
本试剂盒仅供研究使用,不可用于临床、食品、化妆品等领域。
使用方法
1. 细菌培养液 1-5mL,12,000rpm 离心 1 分钟,弃培养液。
2. 加入 200μL 溶菌缓冲液 TE,混匀后加入 10μL 溶菌酶,37℃孵育 5 分钟。
3. 加入 600μL 裂解液 BA 和 10μL 蛋白酶 K,充分混匀,55℃孵育 5 分钟。
备注:如果 RNA 含量未达预期,可适当延长孵育时间至 30 分钟。
4. 12,000rpm 离心 1 分钟。取 700μL 上清。
5. 加入 350μL 无水乙*,充分混匀。
6. 全部加入 RNA 纯化柱中,12,000rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中废液。
7. 向 RNA 纯化柱中加入 500μL 洗涤液 W1,12,000rpm 离心 30 秒,倒掉收集管中废液。
8. 向 RNA 纯化柱中加入 500μL 洗涤液 W2,12,000rpm 离心 30 秒,倒掉收集管中废液。
9. 重复步骤 8 一次。
10. 12,000rpm 离心 2 分钟,倒掉收集管中废液。
11. 将 RNA 纯化柱放入新无 DNase 无 RNase 离心管,加入 30-50μL 洗脱液 BA,室温放置 1 分钟。
12. 12,000rpm 离心 2 分钟,得到 RNA 溶液,-80℃保存。